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44.
钝齿棒杆菌乳酸脱氢酶基因敲除菌株的构建
陈小举, 蒋慧慧, 刘万逛
巢湖学院学报
2021, 23 (6):
85-92.
DOI: 10.12152/j.issn.1672-2868.2021.06.012
目的 钝齿棒杆菌厌氧发酵时,其主要代谢产物为琥珀酸和乳酸。敲除乳酸脱氢酶基因(LdhA)可以减少乳酸的生成,提高钝齿棒杆菌产琥珀酸代谢途径的通量。方法 为获得乳酸脱氢酶基因缺失的钝齿棒杆菌突变株,先通过PCR扩增获得LdhA基因的上、下游同源重组臂及卡那霉素抗性基因(Kn),然后通过融合PCR技术将LdhA基因上、下游同源重组臂与Kn抗性基因连接构建打靶片断与打靶质粒。结果 先后成功构建了打靶片段?LdhA::Kn、打靶质质粒pCVD442-?LdhA::Kn与供体菌株E.coli β2155/pCVD442-?LdhA::Kn,并成功筛选到具有卡那霉素抗性的钝齿棒杆菌单克隆菌株。结论 PCR鉴定与乳酸脱氢酶活力分析结果表明,钝齿棒杆菌基因组中LdhA基因被Kn抗性基因替换,LdhA基因敲除成功,为后续利用钝齿棒杆菌高产琥珀酸奠定了基础。
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